Trong nghiên cứu sinh học, các polypeptide có trình tự dài thường được sử dụng.Đối với các peptide có hơn 60 axit amin trong chuỗi, biểu hiện gen và SDS-PAGE thường được sử dụng để thu được chúng.Tuy nhiên, phương pháp này mất nhiều thời gian và hiệu quả tách sản phẩm cuối cùng không tốt.
Những thách thức và giải pháp tổng hợp peptide dài
Trong quá trình tổng hợp các peptide dài, chúng ta luôn phải đối mặt với một vấn đề, đó là trở ngại không gian của phản ứng ngưng tụ tăng lên khi tăng trình tự trong quá trình tổng hợp và thời gian phản ứng cần được điều chỉnh để phản ứng hoàn thành.Tuy nhiên, thời gian phản ứng càng dài thì càng tạo ra nhiều tác dụng phụ và một phần peptide mục tiêu được hình thành.Những dư lượng như vậy - chuỗi peptide bị thiếu là những tạp chất chính được tạo ra trong quá trình tổng hợp peptide dài.Do đó, trong quá trình tổng hợp peptide dài, vấn đề mấu chốt chúng ta phải khắc phục là tìm hiểu các điều kiện phản ứng và phương pháp phản ứng chất lượng cao để làm cho phản ứng ngưng tụ axit amin trở nên toàn diện và đầy đủ hơn.Ngoài ra, hãy giảm thời gian phản ứng, vì thời gian phản ứng càng dài, phản ứng phụ càng khó kiểm soát, sản phẩm phụ càng phức tạp.Vì vậy, ba điểm sau đây được tóm tắt:
Tổng hợp vi sóng có thể được sử dụng: Đối với một số axit amin gặp phải trong quá trình tổng hợp không dễ tích hợp, có thể sử dụng phương pháp tổng hợp bằng vi sóng.Phương pháp này có kết quả đáng chú ý, giúp giảm đáng kể thời gian phản ứng và giảm sự hình thành hai sản phẩm phụ quan trọng.
Phương pháp tổng hợp mảnh có thể được sử dụng: Khi một số peptide khó tổng hợp bằng các phương pháp tổng hợp thông thường và không dễ tinh chế, chúng ta có thể áp dụng toàn bộ quá trình ngưng tụ của một số axit amin trong một đoạn peptide nhất định thành toàn bộ chuỗi peptide.Phương pháp này còn có thể giải quyết được nhiều vấn đề trong quá trình tổng hợp.
Có thể sử dụng phương pháp tổng hợp acylhydrazide: Tổng hợp acylhydrazide của peptide là phương pháp tổng hợp pha rắn của peptide N-terminal Cys và phản ứng chọn lọc hóa học polypeptide hydrazide đầu cuối C giữa sự hình thành liên kết amide để đạt được phương pháp liên kết peptide.Dựa vào vị trí của Cys trong chuỗi peptide, phương pháp này chia toàn bộ chuỗi peptide thành nhiều chuỗi và tổng hợp chúng tương ứng.Cuối cùng, peptide mục tiêu thu được thông qua phản ứng ngưng tụ pha lỏng.Phương pháp này không chỉ làm giảm đáng kể thời gian tổng hợp peptide dài mà còn làm tăng đáng kể độ tinh khiết của sản phẩm cuối cùng.
Thanh lọc peptide dài
Tính đặc thù của các peptide dài chắc chắn dẫn đến các thành phần phức tạp của peptide thô.Vì vậy, việc tinh chế các peptide dài bằng HPLC cũng là một thách thức.loạt amyloid của quá trình tinh chế polypeptide, tiếp thu nhiều kinh nghiệm và được sử dụng thành công trong việc tinh chế peptide dài.Bằng cách áp dụng thiết bị mới, trộn nhiều hệ thống tinh chế, tách lặp đi lặp lại và các phương pháp kinh nghiệm khác, tỷ lệ thành công của quá trình tinh chế peptide dài đã được cải thiện rất nhiều.
Thời gian đăng: 18-04-2023