Truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang (FRET)
Truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang (FRET) là một quá trình truyền năng lượng không bức xạ, trong đó năng lượng ở trạng thái kích thích của người cho được chuyển sang trạng thái kích thích của người nhận thông qua sự tương tác của các cặp điện liên phân tử.Quá trình này không liên quan đến photon và do đó không bức xạ.Xét nghiệm này có ưu điểm là nhanh, nhạy và đơn giản.
Thuốc nhuộm được sử dụng trong xét nghiệm FRET có thể giống hệt nhau.Nhưng trong hầu hết các ứng dụng, các loại thuốc nhuộm khác nhau thực sự được sử dụng.Tóm lại, sự truyền năng lượng cộng hưởng ánh sáng là sự truyền một cặp lưỡng cực từ chất cho (thuốc nhuộm 1) sang chất nhận (thuốc nhuộm 2) khi nhóm cho bị kích thích.Nhìn chung, phổ phát xạ của nhóm fluorophore Donor trùng lặp với phổ hấp thụ của nhóm Chấp nhận.“Khi khoảng cách giữa hai chất phát huỳnh quang là thích hợp (10 - 100 A), có thể quan sát thấy sự truyền năng lượng fluorophore từ chất cho sang chất nhận”.Phương thức truyền năng lượng phụ thuộc vào cấu trúc hóa học của thụ thể:
1. Được chuyển thành rung động phân tử, nghĩa là ánh sáng rực rỡ truyền năng lượng biến mất.(Thụ thể là chất dập tắt ánh sáng)
2. Sự phát xạ mạnh hơn chính cơ quan thụ cảm, dẫn đến sự dịch chuyển đỏ trong phổ huỳnh quang thứ cấp.”(Các cơ quan thụ cảm là nguồn phát sáng).
Nhóm cho (EDANS) và gen nhận (DABCYL) được liên kết đồng nhất với cơ chất tự nhiên của protease HIV và khi cơ chất không bị ngắt kết nối, DABCYL có thể dập tắt EDANS và sau đó trở nên không thể phát hiện được đối với flo.Khi ngắt kết nối protease HIV-1, EDANS không còn bị DABCYL dập tắt và sau đó có thể phát hiện được EDANS luciferase.Sự sẵn có của các chất ức chế protease có thể được theo dõi bằng sự thay đổi cường độ huỳnh quang của EDANS.
Peptide FRET là công cụ thuận tiện để nghiên cứu tính không đặc hiệu của peptidase.Vì quá trình phản ứng của nó có thể được theo dõi liên tục nên nó cung cấp một phương pháp thuận tiện để phát hiện hoạt động của enzyme.Độ sáng được tạo ra sau quá trình thủy phân các liên kết peptide bởi chất cho/chấp cung cấp thước đo hoạt động của enzyme ở nồng độ nano.Khi peptide FRET còn nguyên vẹn, nó cho thấy sự biến mất đột ngột của đèn flash bên trong, nhưng khi bất kỳ liên kết peptide nào đối diện với chất cho/chất nhận bị phá vỡ, nó sẽ giải phóng một đèn flash, có thể được phát hiện liên tục và hoạt động của enzyme sau đó có thể được định lượng.
Thời gian đăng: 14-08-2023