Các kháng nguyên protein tái tổ hợp thường có nhiều epitop khác nhau, một số là epitop trình tự và một số là epitop cấu trúc.Kháng thể đa dòng thu được bằng cách gây miễn dịch cho động vật bằng kháng nguyên bị biến tính là hỗn hợp các kháng thể đặc hiệu cho từng epitop và có thể được sử dụng nói chung để phát hiện các cấu trúc tự nhiên hoặc protein mục tiêu bị biến tính.Một lợi ích phụ của việc sử dụng protein biến tính làm chất gây miễn dịch là protein bị biến tính có xu hướng gây miễn dịch nhiều hơn và có thể kích thích phản ứng miễn dịch mạnh mẽ ở động vật.
Hệ thống biểu hiện của Escherichia coli thường được chọn cho mục đích kháng nguyên vì đây là hệ thống tốn kém nhất về mặt thời gian và tiền bạc.Để cải thiện khả năng biểu hiện protein mục tiêu và sự thuận tiện cho quá trình tinh chế, đôi khi chỉ một phần nhỏ của protein mục tiêu, chẳng hạn như vùng cụ thể, được biểu hiện.
Cấu trúc ba chiều của protein
Miền cụ thể của protein
Nếu mục đích của việc chuẩn bị kháng thể chỉ là để phát hiện wb thì việc sử dụng peptide nhỏ tổng hợp làm kháng nguyên sẽ tiết kiệm và nhanh chóng hơn, nhưng có nguy cơ về khả năng sinh miễn dịch yếu hoặc không có khả năng tái sinh do lựa chọn đoạn peptide không phù hợp.Do việc chuẩn bị kháng thể đòi hỏi thời gian dài nên hai hoặc ba đoạn peptide khác nhau thường được chọn để điều chế kháng thể sử dụng kháng nguyên polypeptide nhằm đảm bảo tỷ lệ thành công của thí nghiệm.
Độ tinh khiết của kháng nguyên polypeptide để tạo miễn dịch cần phải lớn hơn 80%.Mặc dù về mặt lý thuyết, độ tinh khiết cao hơn có thể thu được kháng thể có độ đặc hiệu tốt hơn, nhưng trên thực tế, động vật luôn tạo ra một số lượng lớn kháng thể không đặc hiệu, do đó che giấu lợi ích của độ tinh khiết kháng nguyên.
Ngoài ra, việc điều chế kháng thể từ các peptide nhỏ phải được liên kết chéo với kháng nguyên mang thích hợp để tăng cường khả năng miễn dịch của nó.Hai chất mang kháng nguyên phổ biến là KLH và BSA.
Thời gian đăng: 23-03-2023