Các giải pháp và lỗi HPLC dễ xảy ra nhất

Là một thiết bị có độ chính xác cao, HPLC có thể dễ dàng dẫn đến một số vấn đề rắc rối nhỏ nếu không được vận hành đúng cách trong quá trình sử dụng.Một trong những vấn đề phổ biến nhất là vấn đề nén cột.Cách khắc phục nhanh sự cố máy sắc ký bị lỗi.Hệ thống HPLC chủ yếu bao gồm chai chứa, máy bơm, kim phun, cột, buồng nhiệt độ cột, máy dò và hệ thống xử lý dữ liệu.Đối với toàn bộ hệ thống, trụ cột, máy bơm và máy dò là những bộ phận quan trọng và là vị trí chính dễ xảy ra sự cố.

Chìa khóa của áp suất cột là khu vực cần được chú ý kỹ khi sử dụng HPLC.Độ ổn định của áp suất cột liên quan chặt chẽ đến hình dạng pic sắc ký, hiệu suất cột, hiệu suất tách và thời gian lưu.Độ ổn định áp suất cột không có nghĩa là giá trị áp suất ổn định ở giá trị ổn định mà là khoảng dao động áp suất nằm trong khoảng 345kPa hoặc 50PSI (cho phép sử dụng phương pháp rửa giải gradient khi áp suất cột ổn định và thay đổi chậm).Áp suất quá cao hoặc quá thấp đều là vấn đề về áp suất cột.

Các giải pháp và lỗi HPLC dễ xảy ra nhất

1, áp suất cao là vấn đề phổ biến nhất khi sử dụng HPLC.Điều này có nghĩa là áp lực tăng đột ngột.Nhìn chung có các nguyên nhân sau: (1) Nói chung là do tắc nghẽn kênh dòng chảy.Tại thời điểm này, chúng ta nên kiểm tra nó từng phần một.Một.Đầu tiên, cắt đầu vào của bơm chân không.Lúc này, ống PEEK được đổ đầy chất lỏng sao cho ống PEEK nhỏ hơn chai dung môi để xem chất lỏng có nhỏ giọt theo ý muốn hay không.Nếu chất lỏng không nhỏ giọt hoặc nhỏ giọt chậm nghĩa là đầu lọc dung môi bị tắc.Xử lý: Ngâm trong axit nitric 30% trong nửa giờ và rửa sạch bằng nước siêu tinh khiết.Nếu chất lỏng nhỏ giọt ngẫu nhiên thì đầu lọc dung môi vẫn bình thường và đang được kiểm tra;b.Mở van xả để pha động không đi qua cột, nếu áp suất giảm không đáng kể thì đầu trắng của bộ lọc bị tắc.Điều trị: Mụn đầu trắng đã lọc được loại bỏ và siêu âm với 10% isopropanol trong nửa giờ.Giả sử áp suất giảm xuống dưới 100PSI thì đầu trắng sau lọc là bình thường và đang được kiểm tra;c.Tháo đầu ra của cột, nếu áp suất không giảm là cột bị tắc.Xử lý: Nếu bị tắc nghẽn do muối đệm, hãy rửa sạch 95% cho đến khi áp suất bình thường.Nếu sự tắc nghẽn là do một số vật liệu có độ bảo quản cao hơn gây ra, thì nên sử dụng dòng chảy mạnh hơn pha động hiện tại để lao về phía áp suất bình thường.Nếu áp suất làm sạch lâu dài không giảm theo phương pháp trên thì ngược lại, đầu vào và đầu ra của cột có thể được coi là được kết nối với thiết bị và cột có thể được làm sạch bằng pha động.Lúc này, nếu áp suất cột vẫn không giảm thì chỉ có thể thay tấm sàng đầu vào cột, nhưng một khi vận hành không tốt sẽ dễ dẫn đến giảm hiệu ứng cột, nên cố gắng sử dụng ít hơn.Đối với những vấn đề khó khăn, việc thay thế cột có thể được xem xét.

(2) Cài đặt tốc độ dòng chảy không chính xác: Có thể đặt lại tốc độ dòng chảy chính xác.

(3) Tỷ lệ dòng chảy không chính xác: chỉ số độ nhớt của các tỷ lệ dòng chảy khác nhau là khác nhau và áp suất hệ thống tương ứng của dòng chảy có độ nhớt cao hơn cũng lớn hơn.Nếu có thể, có thể thay thế hoặc chuẩn bị lại các dung môi có độ nhớt thấp hơn.

(4) Độ lệch điểm 0 của áp suất hệ thống: điều chỉnh điểm 0 của cảm biến mức chất lỏng.

2, áp suất quá thấp (1) thường là do hệ thống rò rỉ.Phải làm gì: Tìm từng kết nối, đặc biệt là giao diện ở hai đầu cột và siết chặt khu vực rò rỉ.Tháo trụ và siết chặt hoặc lót màng PTFE với lực thích hợp.

(2) Khí đi vào bơm nhưng áp suất lúc này thường không ổn định, cao thấp.Nghiêm trọng hơn, máy bơm sẽ không thể hút được chất lỏng.Phương pháp xử lý: mở van làm sạch và làm sạch với tốc độ dòng 3 ~ 5ml/phút.Nếu không, bọt khí sẽ được hút ở van xả bằng ống kim chuyên dụng.

(3) Không có dòng chảy ra khỏi pha động: kiểm tra xem có pha động trong bình chứa hay không, bồn rửa có được ngâm trong pha động hay không và bơm có chạy hay không.

(4) Van tham chiếu không đóng: Van tham chiếu đóng sau khi giảm tốc.Nó thường giảm xuống 0,1.~ 0,2mL/ phút sau khi đóng van tham chiếu.

Bản tóm tắt:

Trong bài báo này chỉ phân tích các vấn đề thường gặp trong sắc ký lỏng.Tất nhiên, trong ứng dụng thực tế, chúng ta sẽ gặp thêm nhiều vấn đề khác.Khi xử lý lỗi, chúng ta nên tuân thủ các nguyên tắc sau: mỗi lần chỉ thay đổi một yếu tố để xác định mối quan hệ giữa yếu tố giả định và vấn đề;Nói chung, khi thay thế các bộ phận để khắc phục sự cố, chúng ta nên chú ý đặt lại những bộ phận còn nguyên vẹn đã tháo dỡ để tránh lãng phí;Hình thành thói quen ghi chép tốt là chìa khóa thành công trong việc xử lý lỗi.Tóm lại, khi sử dụng HPLC, điều quan trọng là phải chú ý đến tiền xử lý mẫu cũng như vận hành và bảo trì thiết bị đúng cách.